| 当我们谈论奥希替尼耐药时，最普遍的含义是指EGFR三重突变（奥希替尼二线治疗EGFR突变非小细胞肺癌耐药患者约21%为C797S阳性突变），即Del19/T790M/C797S或L858R/T790M/C797S的顺式突变，三个突变基因位于同一条链上。 虽然L858R与Del19作为EGFR经典突变总是被同时提起，治疗方式也多有重合，但从敏感性、临床表现等方面来看，对两种突变加以细分才是未来趋势。目前报道较多的EGFR四代药，如EAI-045、JBJ-04-125-02等，多是针对L858R的双重及三重突变，而Del19的研究相对较少。 事实上，Del19患者发生T790M突变的概率更高，相应的Del19/T790M/C797S患者也更多。今天要介绍的，就是一种专门针对Del19系列突变的第四代EGFR-TKI——CH7233163。 临床前试验数据 通过对上百万种化合物进行EGFR-Del19/T790M/C797S酶抑制剂的高通量筛选，得到强烈抑制EGFR-Del19/T790M/C797S的先导化合物，经过结构修饰，最终获得了新型抑制剂CH7233163。在2020年 AACR年会上，作为第四代EGFR抑制剂，CH7233163公布了临床前数据（来自罗氏公司（Roche）旗下中外制药（CHUGAI））。  （CH7233163的结构式） 在EGFR-Del19/T790M/C797S生化分析中，CH7233163的IC50¼=0.28 nmol/L，而奥希替尼的IC50>100nmol/L、第一个四代抑制剂EAI-045>1000nmol/L，不具有抑制活性。  在细胞生物活性实验中，建立Del19/T790M/C797S突变的的NIH3T3细胞，检测出CH7233163可有效抑制Del19/T790M/C797S_NIH3T3细胞的增殖，阻断细胞中的EGFR磷酸化。  (使用Del19/T790M/C797S_NIH3T3细胞测定CH7233163、奥希替尼和EAI-045的抗增殖活性)  (与DMSO对照，CH7233163或奥希替尼处理6小时后，通过Western blotting分析Del19/T790M/C797S_NIH3T3细胞中的EGFR活性) 在小鼠体内实验中，每天一次给予携带Del19/T790M/C797S_NIH3T3细胞的小鼠口服CH7233163，奥希替尼做对照组，连续7天测量每剂量肿瘤体积和体重的变化。 可以观察到，在100mg/kg时CH7233163实验组小鼠明显出现肿瘤消退，而任何剂量下的对照组和实验组小鼠的体重和体征无显著差异，未出现毒性反应。  非共价ATP竞争性抑制剂 CH7233163对Del19/T790M/C797S的抑制活性随着ATP浓度的升高而降低（下图A），而且在野生型EGFR上表现出选择性。 对于EGFR-TKIs来说，是否具有选择性是很重要的，如果不加选择地抑制野生型EGFR，会产生一系列副作用如皮疹、腹泻等，甚至不得不降低剂量上限。 CH7233163在野生型和突变型上的选择性类似于奥希替尼（下图D）。  CH7233163在氢键和CH/π键作用下与ATP通过多种氨基酸结合，但与现有的大多数抑制剂不同，这些相互作用均不表现为共价结合。 CH7233163在ATP活性口袋中的结合比奥希替尼更深，不仅与P环和铰链区相互作用，而且还直接与残基T790M相互作用，奥希替尼则不发生作用（下图C）。这些结果表明，多种非共价相互作用，包括与T790M的相互作用，可能与CH7233163抗三重突变EGFR的效力有关。此外，T790M在EGFR野生型中不存在，这也是CH7233163对EGFR野生型的突变选择性抑制的原理之一。  （CH7233163以及对照组的复合体结构、结合位点） 通过比较EAI-045与CH7233163与EFGR结合的复合物，发现其αC螺旋构象不同。EAI-045以αC-helix-out构象结合，而CH7233163为αC-helix-in。这种结合模式对于Del19突变抑制剂非常重要，因为Del19突变不会形成向外螺旋，这也就是αC-helix-out的EAI-045不能抑制Del19系列突变的原因所在。 CH7233163选择性地抑制各种EGFR突变体 尽管在研究之初，CH7233163的设计是为了对抗EGFR-Del19/T790M/C797S，但在生化评估中发现，CH7233163的能力并不仅限于此。 在生化实验中CH7233163有效抑制了L858R/T790M/C797S的磷酸化活性，IC50值为0.25 nmol/L；对L858R/T790M/C797S_NIH3T3细胞，表现出抗增殖活性IC50¼=45 nmol/L，已经接近了它在抑制Del19/T790M/C797S时的效果。 而在EGFR双突变（L858R/T790M）和单突变（Del19）的人肺癌细胞系NCI-H1975和HCC827中，CH7233163抑制肿瘤生长的效果类似奥希替尼。  这也初步证明了CH7233163可能对EGFR三突变(Del19/T790M/C797S 和EGFR-L858R/T790M/C797S）、EGFR双突变（Del19/T790M和L858R/T790M）和单激活突变（Del19和L858R）都有抑制作用。 总结 CH7233163是一种EGFR-Del19/T790M/C797S的非共价ATP竞争性抑制剂，通过与EGFR-αC-helix-in构象的多重结合，实现抑制活性并具有良好的选择性。 虽然还需要等待进一步的临床试验评估，但其抑制六种EGFR突变的能力极具潜力，值得期待。 |
