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5 l/ W, y, ^! g. p n9 h1 U/ s) ^7 c作者:闵& W# T }$ @* A8 B9 _. d8 E
, i1 D4 M0 \! B0 V首先,从规范角度出发:目前认可的,取得注册证的PD-L1表达检测技术就是IHC免疫组化技术,获批的有DAKO公司的22c3、28-8试剂盒、罗氏的SP142,SP263试剂盒等等,暂时未有血液PD-L1检测获得批准。
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8 y4 _' D) Q0 Q第二,从检测理论出发:目前各临床实验亚组分类的时候,采用的指标均为PD-L1表达(即PD-L1蛋白表达),而蛋白表达临床检测中最常用的检测技术即为IHC免疫组化技术,检测基本原理是通过试剂盒中相应的抗体与目标蛋白,即肿瘤细胞中的PD-L1蛋白结合,随后即可在显微镜下显色,这并不是最终目的,PD-L1表达检测的最后一步,是要统计计算切片下所有肿瘤细胞中被染色(即携带有PD-L1表达)的肿瘤细胞占比,由此得到的百分数,即为PD-L1表达分数(0%-100%)。, C* @+ P9 W+ h7 e" X1 V9 I
红圈所示,即为病人标本中携带有PD-L1表达的肿瘤细胞(该病人PD-L1表达5%) 7 I- v1 p5 R5 N5 i6 q
因此,要满足免疫组化的检测条件,首先就得保证足够的细胞,至少要有100个肿瘤细胞,组织标本大多数能够满足,血液标本中细胞含量远低于组织,较难达标;第二点要求,即免疫组化染色时需要目标细胞固定,方便后续将多余试剂洗脱,组织标本因为都是进过福尔马林、乙醇以及石蜡固定,所以细胞位置固定,不易脱落;而血液即便滴在载玻片上,用盖玻片压住,也容易发生流动,无法进行染色及洗脱操作,更无法进行后续统计步骤。7 L+ V6 I/ k5 ?( H, @9 w: ~3 O
' S+ e' k$ |/ I+ J, v; \第三,从检测技术上出发:有些检测公司会混淆视听,声称自己采用PCR法解决了血检PD-L1的难题,可以代替组织检测,这种说法没有规范上认可,也存在原理上的差异。
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5 e8 x1 ~# u, r% e* `首先PCR技术是对基因或者更确切说对DNA、RNA的检测,通过对目标DNA/RNA不停的复制扩增,达到指数倍放大信号的目的,某个基因想要最终发挥功能,需遵循中心法则,以DNA为起点,转录生成RNA,再翻译组装形成蛋白质,成为蛋白质之后,才能在细胞活动中发挥功能,如PD-L1蛋白则是有PD-L1基因从DNA转录成RNA,再翻译组装最终形成相应蛋白。$ N5 K. u6 ]" m4 ]& `4 V
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从上图可以看到,从DNA到蛋白质,需要经历转录、翻译两个步骤,而这两个步骤又受到细胞内各个信号通路的调控,随时可能增量或者减量,也就是说,DNA的数量并不直接与实际蛋白表达量等同,有可能DNA量很多,但是由于调控,导致转录翻译形成的蛋白量并不多。
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3 B* x0 T+ s4 j, t) t$ D2 p总结
. s, @* W; e: i, Z! u目前市场上存在号称可以用血液检测PD-L1表达的基因检测公司,这些检测多数采用PCR技术用血检测PD-L1表达且只标注基因表达,连测的是DNA还是RNA都不明确,而作为结果的Ct值*也不直接等同于DNA或RNA表达量。根据中心法则以及既往相关研究,血液PD-L1 mRNA表达与组织PD-L1表达并无显著相关性,也就是说市面上这种所谓血液PD-L1表达的结果根本没有参考价值。9 ?9 A- K. r5 p) }
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简单讲,Ct值就是qPCR中起始模板扩增达到一定产物量时,所对应的循环数。
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- K3 e" t; t; o无论从技术规范、检测理论还是检测技术上来说,目前市场上存在的所谓血检PD-L1技术,不是领先反而只是忽悠,对病人没有一点帮助,谨记。
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